Målgrupper og anvendelsesområde
Definitioner
Fremgangsmåde
Ansvar og organisering
Referencer, lovgivning og faglig evidens samt links hertil
Akkrediteringsstandarder
Bilag

Målgrupper og anvendelsesområde

Instruktionen gælder for personalet i Patologiafdelingen.

Hurtig og ensartet procedure for mutationsundersøgelse ved kolorektal cancer.

Tilbage til top

Definitioner

KRAS gruppen.

Ansvarlig molekylærbiolog: Jesper Bonde.
Søjleansvarlig patolog: Overlæge Huma Gul Rehana Janjua
Ansvarlig molekylærlaborant: Helle Pedersen

Tilbage til top

Fremgangsmåde

Mutationsundersøgelser ved kolorektal cancer i Patologiafdelingen på Hvidovre Hospital.

Visitation af patienter til anti-EGFR behandling kræver undersøgelse for mutationer i KRAS samt NRAS. Undersøgelsen udføres for mutationer i KRAS, BRAF og NRAS generne på tumorvæv.

Undersøgelsen udføres på følgende materialetyper:

Biopsier fra patienter med nydiagnosticeret kolorektalcancer
Kolorektalcancer resektater med ≥pT2 tumorer
Metastaser fra kolorektalcancer

Undersøgelsen foregår i direkte forlængelse af den sædvanlige undersøgelse af kolorektalcancer præparatet, og resultatet af undersøgelsen sendes til rekvirenten som et supplerende svar.

Patologen bestiller undersøgelsen, som beskrevet i instruksen "Bestilling af PCR på histologisk prøve- arbejdsgang for læger":

Patologen identificerer det bedst egnede materiale til undersøgelse, fortrinsvist med angivelse af én formalin fikseret-paraffin indstøbt blok til undersøgelse.
Patologen identificerer et egnet tumorområde med tusch på det tilhørende glas. "Procent tumorcellekerner" skal anføres på glasset, samt initialer.
Af hensyn til analysens sensitivitet samt sikker diagnostik bør et præparat indeholde ≥10% tumorcellekerner i det markerede område i forhold til ikke tumorceller.
Det er af yderste vigtighed at sikre adenom-væv i mindst muligt omfang indgår i analysen da det kan give ophav til falsk positive analysesvar.
Ved 1-10% tumorcellerkerner i relevant område vurderes præparatet af molekylærbiolog før analysen igangsættes.
Alle supplerende tekster skrives under "Supplering af rekv", "supplerende tekster". Her vælges teksttype "Molekylæranalyse" og teksten skrives i "supplerende tekst" feltet.
Patologen indsætter som supplerende tekst fraseteksten "KRASre" ved at skrive "Krasre", markere "KRASre" og taste control T.
Fraseteksten er: "Prøve xx blok xx vurderes egnet. Vurderingen er foretaget på glas xxxx. Procent tumorceller i det tusch-markerede område er xx %”. Initialer
Lægen bestiller KRAS, BRAF, NRAS og et efterfølgende kontrol KRASHE-snit, der indgår i patologens vurdering af, om andelen af tumorceller til PCR-analysen har været tilstrækkeligt.
Kontrol KRASHE-snit kan udgå ved bestilling af MMR
Glasset afleveres i KRAS-bakken i mol lab.
Bioanalytikeren skærer materialet i hht. bestilling

Proceduren følges også, når kliniker rekvirerer mutationsundersøgelse på andre materialetyper.

Procedure efter PCR-kørsel for mutationsanalyse.

Molekylær Patologisk Laboratorium skriver resultatet af undersøgelsen under "Supplering af rekv", "supplerende tekster". Her vælges teksttype "Molekylæranalyse" og teksten skrives i "supplerende tekst" feltet. Se forskriften Svarafgivelse på molekylære RAS analyser
Molekylær lab afleverer følgende til patologen:
- Glasset med patologens markerede tumorområde (hvor % tumorcellekerne angivelsen er anført).
- Glasset med kontrol KRASHE-snit.
Patologen tjekker, at kontrol KRASHE-snittet indeholder tilstrækkelig mængde tumorvæv som på glasset med det markerede tumorområde.
- Hvis det ikke er tilfældet, vurderer speciallægen, om analysen skal gentages på en anden vævsblok.
- Indeholder kontrol KRASHE-snittet tilstrækkelig mængde tumorvæv, besvares KRAS undersøgelsen til rekvirenten.
Svaret på rekvisitionen er standardiseret og vil derfor altid indeholde følgende:
- Prøve [xx], blok [yy] vurderes egnet. Vurderingen er foretaget på glas [zz]. Procent tumorcellekerner i det markerede område er [xx] %. [angivelse af initialer]
- Blok xx.xx:
- Der er/er ikke påvist mutation i KRAS-genet.
- Der er/er ikke påvist mutation i BRAF-genet.
- Der er/er ikke påvist mutation i NRAS-genet.
- Analysen er udført på Idylla analyseplatform. Analysen undersøger i alt 38 RAS-mutation, heraf 18 punktmutationer i KRAS (codon 12, 13, 59, 61, 117 og 146), 4 punktmutationer i BRAF (codon 600) samt 16 punktmutationer i NRAS (codon 12, 13, 59, 61, 117 og 146). Detaljeret oversigt over definerede punktmutationer kan fås ved henvendelse på ###EMAIL###

Er der påvist mutation i et af generne vil der efter teksten blive tilføjet tekst med mutationen.

Proceduren følges også, når kliniker rekvirerer mutationsundersøgelse på andre materialetyper. Ved undersøgelser på ældre præparater, beder patologen patologiafdelingens sekretariat om at sende svaret til den rekvirerende onkologiske afdeling. Ved undersøgelser på præparater fra tidligere år oprettes et nyt rekv. nr. til præparatet.

Er der påvist mutation V600E/V600D (p.Val600Glu/p.Val600Asp) vil differentieringen mellem mutationerne blive foretaget automatisk af Molekylær Patologisk Laboratorie. Glas bliver bestilt af Molekylær Patologisk Laboratorie som et farvesæt og bestilles som BRAFG og indeholder også kontrol HE-glas.

Mutationsstatus svares ud som supplerende analyse.

Eventuel methyleringsanalyse bestilles efter svarafgivelse på BRAF. Methyleringsanalysen foretages pt på Rigshospitalet.

Kodning af KRAS svaret (diagnoser) på rekvisitionen:

###TABEL_1###

Kodning af BRAF svaret (diagnoser) på rekvisitionen:

Vær opmærksom på at kun aminosyrer indgår i selve kodesvaret.

###TABEL_2### ###TABEL_3###

Kodning af NRAS svaret (diagnoser) på rekvisitionen:

###TABEL_4###

Koden for PCR er obligatorisk:

P33B30 Polymerase kædereaktion (PCR) analyse

Patologen koder og godkender svaret, der tilgår rekvirenten elektronisk.

Patologen lægger glassene til arkivering.

Proceduren følges også, når kliniker rekvirerer mutationsundersøgelse på andre præparater. Ved undersøgelser på ældre præparater, beder patologen patologiafdelingens sekretariat om at sende svaret til den onkologiske afdeling, der har rekvireret undersøgelsen. Ved undersøgelser på præparater fra andre år end det indeværende oprettes et nyt rekv nr til præparatet.

Supplerende:

Se gældende forskrifter: