Skæring af paraffinblokke

Målgrupper og anvendelsesområde
Definitioner
Fremgangsmåde
Ansvar og organisering
Referencer, lovgivning og faglig evidens samt links hertil
Akkrediteringsstandarder
Bilag

Målgrupper og anvendelsesområde
Bioanalytikere
At sikre en korrekt og ensartet procedure ved skæring af vævssnit, samt forhindre skæreskader.

Definitioner

Fremgangsmåde
Forholdsregler ved skæring af paraffinsnit på mikrotom
- Studerende instrueres ved skæring (af underviser), de må kun bruge rotationsmikrotomen manuelt, og må aldrig skære alene.
- Nyansatte introduceres altid, uanset erfaring med skæring. Der oplæres i slæde- eller rotationsmikrotom herunder brug af motor. Det vurderes individuelt, hvornår den enkelte bioanalytiker kan sidde alene ved mikrotomet. 
- Placer vandbadet, så man ikke skal række over kniven for at komme snit i vandbadet.
- Brug pensel til aftørring af kniven, ALDRIG fingrene.
- Lås altid rotationsmikrotomet ved skift af kniv og benyt knivbeskytteren ved isætning, aftagning og justering af blok.
- På slædemikrotomet skubbes slæden helt tilbage, der låses og knivbeskytteren benyttes ved isætning, aftagning og justering af blok.
- Skub slæden helt tilbage og lås denne ved arbejde med snit i vandbadet.
- Overfør snittene til vandbad med pensel og/eller pincet.
- Hvis mikrotomet forlades med knivblad i, skal den være beskyttet og låst og det skal være tydeligt markeret, at der er kniv i. 
- Fjern knivblad før rengøring.
- Vær opmærksom på ved rengøring, at knivholderen også kan være skarp.
Ved uheld
- Lad såret bløde, gerne under rindende vand.
- Vask med vand og sæbe.
- Rens med 70 % ethanol.
- Plaster på ved behov.
- Evt. henvendelse til skadestue.
- Kontakt arbejdsmiljørepræsentant for skadesanmeldelse.
Skæring
Bioanalytiker logger sig på "Skærerens arbejdsplads " med sit BAM-ID og selvvalgt adgangskode i Patologisystemet. Blokken skannes ind og billedet med prøvenummer og tilhørende glas kommer frem. Hvis blokken tages ud af mikrotomet, inden den er færdig skåret, f.eks. for at køle, skal den skannes ind igen.
Inden man begynder at skære, skal man vurdere om vævet er støbt i niveau, og om vævet er orienteret rigtigt. Det er vigtigt, at man omstøber blokken, hvis dette ikke er gældende. Hvis man har skåret i blokken og opdager at den ikke er støbt optimalt, må man ikke omstøbe den uden at snakke med lægen der står som undersøger. Eventuelt kan man lave en skærenote, og skære blokken som den er. 
Blokken spændes fast i mikrotomet, og der skæres ned i blokken, til hele vævsstykket er repræsenteret. Justér blokvinklen om nødvendigt. Man skal aldrig skære så dybt at prøvemateriale forsvinder. Hvert objektglas med egnede snit skannes ind og de godkendte glas får et grønt flueben på skærmen. For at sikre at blok og objektglas har samme nummer. Ved uoverensstemmelser eller kommentare til snit kan man bruge QR-koderne, som ligger ved hver skæreplads (f.eks en note om væv der ridser eller ujævn indstøbning).
OBS: Der må ikke skæres længere ned i blokken, end at alt vævet er repræsenteret på sidste glas.
- Blokkene lægges på kuldepladen i nummerisk rækkefølge som objektglassene.
- Alle blokke skæres på max. 2 µm på rotationsmikrotom og max. 1,5 µm på slædemikrotom, hvis man puster på blokken når man skærer snit, kan man med fordel sætte sin µ-tæller lavere, da snittene vil blive lidt tykkere. Vær ekstra opmærksom på snittykkelsen ved skæring af AutoTec-kapsler med net, da snittene har tendens til at blive tykke. 
- Snit til immunfarvninger, Was3 og Rhodanin, skæres på 3 µm. Snit til alkalisk Congo skæres på ca. 8 -10 µm og snit til Klüver skæres på 5-10 µm. Øvrige specialfarvninger skæres på 2 µm.
- Egnede snit lægges i koldt ionbyttet vand(man kan også springe dette over), hvor synlige folder rettes ud, hvorefter det ved hjælp af objektglasset flyttes over i varmt ionbyttet vand (ca. 45° C, det er markeret på hvert vandbad, hvor skruen skal stå for den rette temperatur. Denne skal ikke justeres. Hvis man er usikker på temperaturen i vandbadet tjekkes den med termometer) Når snittet er rettet ud, fiskes det op på det tilhørende objektglas. 
- Der må kun ligge snit i vandbadet fra 1 blok ad gangen!
- Vandbad skal renses omhyggeligt med papir efter hver patientprøve og hver gang der er synlige fnuller i vandet. 
- Glassene med HE-snit sættes i træstiger, så vandet kan løbe af. Herefter sættes glassene i sorte racks og kommes på farvemaskinen (coverstainer). Man sætter over løbende. Del dog aldrig et nummer.
- Snit til specialfarvninger APAS, WAS og AV placeres på stiger og sættes foran varmeskab i specialfarvningen. Der er farvninger der skal i varmeskabet, dette tjekkes på listen på varmeskabet. Ved tvivl spørg den der er i farvelab. 
- Snit til immunfarvning (P16) sættes 30 min. i 60 °C varmeskab i immunlaboratoriet.
- Alle snit til immunfarvninger samt ufarvede glas skal placeres nederst på glasset, da der skal være plads til den tilhørende kontrol. P16-glas skal altid have et kontrolsnit siddende øverst på glasset.
- Der sættes 1 snit på hvert glas. 
- Hvis der skal skæres flere glas på samme blok, skal snittene orienteres ens på glassene. Det kan være en hjælp at skære et hjørne af paraffinen for nemmere orientering ved skæring. 
Prioritering af blokkene:
- Hasteblokke samt bestillinger skæres først.
- Cancerpakker prioriteres efter hasteblokke og bestillinger.
- Rutineblokke skæres i den rækkefølge de er indstøbt. Man prioriterer altid de ældste blokke først. 
Ved skæring af trin er det altid en vurdering af vævet, om de angivne trin er mulige. Beskrevet niveau-afstand er derfor kun vejledende.
Skæring af gyn. præparater:
Konus: Skær ned til hele vævstykket er repræsenteret og tag 1 snit til første glas. Skær derefter ca. 300 µm ned i blokken vha. µm-tælleren, og tag 1 snit til glas nr. to.
Biopsier & skrab: Skæres i trinsnit med 1 snit på 1. glas, dernæst et 3µm tykt snit til P16-farvning og til sidst skæres ca. 100µm ned i blokken, hvorefter der tages 1 snit til 3. glas. Det tilstræbes at det 3. snit er midt i biopsierne.
Andet væv: Skæres så der er 1 fuldt snit af materialet, såfremt det er muligt.
Skæring af hud og gas præparater: 
Nål1 (1 glas): HE skæres på 2 µm og der sættes 1 snit på glasset.
Nål15 (15 glas): Vær særlig opmærksom ved tilskæring/trimning. Man skal blot ramme overfladen af nålen inden man påbegynder skæring af glas, da det oftest er sparsomt med væv. Alle snit skæres i serie, så vidt det er muligt. Alle snit skæres på 3 µm og der placeres 2 vævssnit nederst på hvert glas. Fjern overskydende paraffin i blokken omkring nålen, så der er plads til 2 snit på glassene. Der kan evt. laves et lille hak i et hjørne af paraffinen for orienteringens skyld.
Vær opmærksom på at glas nr. 7, 10, 11 og 13 er immunglas, som skal have et kontrolsnit øverst på glasset. 
Ventrikel- og tarmbiopsier: Der skæres ned i blokken til alle biopsier er repræsenterede. De skæres seriesnit med et snit på hvert glas, hvor HE og APAS skæres på 2 µm, og WAS3 på 3 µm. Snittene skal have samme orientering på alle glas.
Skæring af makroblokke: Ved skæring af makroblokke anvendes en speciel blokholder. HE-makroglas skæres på 3 µm. De farves i specialfarve-laboratoriet. Hvis vævet er dårligt præpareret kan man med fordel sætte glassene 20 min. i varmeskab inden farvning (spørg evt. din kollega i farve-lab. til råds). 
Ekstra-bestillinger:
HE, specialfarvninger og immuner: Der tages "snit på stedet", dvs. det første snit man kan få, uden at skære unødigt ned i blokken, da man ellers risikerer at skære den forandring væk, der ønskes ekstra snit på. Dette kræver, at man vinkler blokken, så den kan skæres i samme vinkel, som den sidst blev skåret i. 
Trinsnit: Flere glas med 1 snit på hvert glas, taget i forskellige niveauer ned i blokken. Hvert glas indeholder ét niveau. Det er en individuel vurdering, hvor langt man skal skære ned i blokken mellem de forskellige trinsnit, men det tilstræbes, at der er samme afstand mellem hvert niveau. Man må ikke skære vævet helt væk.
Det tilstræbes, at 3 x THE er det samme som én DHE i dybde, men det er altid den enkelte bioanalytiker, der fortager en vurdering af, hvor langt ned i blokken der skal skæres.
Dybere (DHE): Et glas med 1 snit taget i dybere niveau ("dybere" er længere ned i blokken end trinsnit). Det er en individuel vurdering, hvor langt man skal skære ned i blokken. Man må dog kke skære vævet helt væk.
Skærop: Ved total opskæring skæres trinsnit, med 1 snit på hvert glas indtil, der ikke er mere væv i blokken eller indtil man skærer ned i plastikkapslen, hvilket noteres i interne noter. Rutinemæssigt støbes vævet ikke om medmindre lægen beder om det. Antallet af glas ved opskæring kan derfor variere.
Kvalitets-HE (KVHE): Tjek "interne noter" for beskrivelse af, hvorfor der ønskes KVHE.
Ved manglende glas:
- For uskåret blok gælder:
- de manglende glas udskrives på ny. Tjek i patologisystemet i "oversigt/klarmeld" på rekvisition niveau om glasset er udskrevet før. Der vil stå (U) ved glasset, hvis det har været udskrevet tidligere. Hvis glasset allerede er udskrevet, og man printer et nyt glas, noteres det i interne noter samt dato + initialer.
- For allerede skåret blok gælder:
- der oprettes nye glas (efter de allerede oprettede glas, f.ek. glas 3 + 4) og disse udskrives. De første "manglende glas" korrigeres til "kasseret". Dette noteres i interne noter samt dato + initialer.
Daglig rengøring af mikrotomer:
- Engangsknive fjernes fra knivholderen, knivholderen aftørres. På rotationsmikrotomerne skal knivholderen tages af for at kunne tørre den bagpå (pas på, da denne kan være skarp).
- Der støvsuges og mikrotom samt bord tørres af.
- Det kolde vandbad hældes ud, og karet sættes til vask på rullebord i udskæringen.
- Det varme vandbad hældes ud, hvorefter badet aftørres med serviet og renses med blå wet wipe (husk handsker).

Ansvar og organisering
Alle bioanalytikerne har ansvaret for at denne instruktion efterleves.
Superbrugerne har ansvaret for at instruksen opdateres ved ændring i metoden.

Referencer, lovgivning og faglig evidens samt links hertil

Akkrediteringsstandarder

Bilag
Bestilling og skæring af immuner og specialfarvninger