06.2.HH.10.6 Galaktoseanalyse
Formål
Målgruppe og anvendelsesområde
Forberedelse
Fremgangsmåde
Beregning
Svarafgivelse
Referenceområde
Fejlkilder
Ansvar og organisering
Formularer
Definitioner
Referencer/Litteratur
Bilag/links
Beregning i hånden.
Formål
Kvantitering af leverfunktionen ud fra blodets elimination af intravenøst indgivet galactose.
Analyseprincip:
Galactosedehydrogenase katalyserer oxidationen af galactose til galaktonolacton og reduktionen af NAD+ til NADH.
Ved relativ høj koncentration af galactosedehydrogenase og NAD+ og bestemt pH, forløber reaktionen helt til højre.
Extinctionsstigningen måles ved 340nm.
(NADH har absorptionsmaximum ved 340 nm.)
Målgruppe og anvendelsesområde
Denne instruks er gældende for alle medarbejdere, der udfører analysen i klinsk fysiologisk/nuklearmedicinsk sektion, Funktions- og Billeddiagnostisk Enhed, Hvidovre Hospital.
Forberedelse
Apparatur
Shimadzu uv-160A fotometer. Tænd fotometeret 1 time før brug. Se vejledning.
Hamilton Diluter. Se vejledning.
Microman pipette
PH-meter
Varmeskab
Reagenser 
D-galactose, pyrogenfrit (kulhydratindhold min. 98%, heraf max. 1% glucose og totalt max. 5% andre kulhydrater end galactose). Merck 4060
Nicotinamidadenindinucleotid (NAD
Galactosedehydrogenase (GDH) 5mg/ml. Roche nr. 104981
Glycin pro analyse. Merck 4201
Kaliumhydroxid (KOH) 1mol/l. Apoteket.
Perchlorsyre (PCA) 0,3 N. Apoteket. (Skal have stuetemperatur)
Sterilt H2O. Apoteket. (Skal have stuetemperatur)
Fremstilling af reagensopløsninger:
Glycinbuffer 1,2M:
90g glycin opløses i ca.750 ml sterilt H2O i en 1000 ml kolbe.
pH indstilles til 8,9 med 1mol/l KOH (ca.90-100 ml) ved hjælp af pH-meter. Se 06.2.HH.10.12 Bilag 1. Kort vejledning - Måling af pH
Sterilt H2O ad 1000 ml. (holdbar 1 mdr. i køleskab).
Glycinbrugsbuffer:
200 ml glycinbuffer +160 mg NAD+ ( fremstilles lige før brug).
Fremstilling af standarder:
Standarderne fremstilles i sterile glasvarer. (Glas i metalstativ og kolbe stilles i varmeskab ved 1700 C. i 1 time).
1,0 mmol/l:
72,0 mg D-galaktose ad 400 ml sterilt H2O. ( afpippeteres i store glasglas og opbevares i fryser).
35,0 mmol/l:
0,6306g D-galaktose ad 100 ml sterilt H2O. ( 250 µl afpippeteres i store glasglas og opbevares i fryser).
Infusionsstandard:
Fortynding 1:2500 . 100 µl galaktosestamopløsning 400 mg/ml (den opløsning pt. får.) ad 250 ml ionbyttet H2O.
Blodstandard:
250 µl 35 mmol/l galaktosestandard + 2000 µl 0-prøve.
Fældes som blodprøverne.
Prøverne: (Behandlingen af prøverne sker i forbindelse med Levervenekateterisationen)
Fældning/centrifugering af galaktoseprøver ved undersøgelsen:
Alm.galaktosebelastning (LVK) :
200 µl fuldblod + 1800 µl 0,3 N PCA
Øregalaktosebelastning:
50 µl fuldblod + 600 µl 0,3 N PCA
Prøverne skal efter fældning stå mindst 1 time i køleskab.
Derefter opblandes og centrifugeres de i kølecentrifuge v.4 0C. i 30 min. ved 3000 omdr./min.
Hvis supernatanten ikke er helt klar, skal prøverne centrifugeres én gang til.
Supernatanten afpippeteres i glasglas og gemmes højst 1 uge i køleskab. (Må ikke fryses)
Fældning/fortynding af uriner:
Er der kun en urin fældes og fortyndes den således: Faktor
###TABEL_1###
To uriner:
Første urin behandles som ovenfor.
Den anden urin fældes og fortyndes således: Faktor
###TABEL_2###
Fremgangsmåde
Brugsbuffer, standarder og prøver skal have stuetemperatur inden analyseringen.
Prøverne hvrivles inden analysering.
Analysen udføres i 10 ml plastglas.
Der udføres en reference + dobbeltbestemmelse for hver prøve i følgende rækkefølge:
3 standarder på 1mmol/l
infusionsstandard
blodstandard
prøver
urinfortyndinger
3 standarder på 1mmol/l
Prøve+ buffer afpippeteres i glassene v.h.a. Hamilton diluter, derefter tilsættes GDH med microman pippette og med passende interval
5,10,15 sek). Se nedenstående skema:
###TABEL_3###
Efter blanding på mixer, henstår prøverne 60 min. ved stuetemp., herefter blandes de igen på mixer og aflæses på Shimadzu ved 340 nm.
Prøver med extinctioner højere end 1,0 skal genanalyseres efter fortynding.
Beregning 
Programmet til beregning af galaktose findes på computeren i fotometri.
Svarafgivelse
Benyt Galaktose program på computeren i fotometri.
Genfinding af infusionsstandard og blodstandard skal være 90 - 110 %. Disse % fremgår af beregningsarket. Hvis tallene falder udenfor skal de konfereres med den ledende bioanalytiker.
Tag 2 print. Det ene print sættes i galaktosemappen, og det andet eksemplar lægges i patientens charteque.
Der skal derefter udfyldes et svarskema, som lægges i chartequet. Når svarskemaet er udfyldt med patientens analyser afleveres patient charteque på bioanalytikerkontoret.
Referenceområde
Kvinder: Nedre grænse 1,4 mmol/min
Mænd: Nedre grænse 1,7 mmol/min
Fejlkilder 
Brugsbuffer, standarder og prøver, der ikke har opnået stuetemp.
Mangelfuld opblanding af prøver og standarder.
Uklarhed i centrifugerede prøver.
Ansvar og organisering
Ledende bioanalytiker har ansvaret for udarbejdelse og vedligeholdelse af instruksen.
Sektionsledelsen har ansvar for at godkende og realisere denne instruks.
Alle medarbejdere som udfører galaktoseanalysen har ansvar for at følge denne instruks.
Formularer
Ikke relevant.
Definitioner
Ikke relevant.
Referencer/Litteratur
Tygstrup. Acta Med Scand1964;175: 281-9.
Lindskov. Acta Med Scand 1982; 212: 295-302.
Ramsøe et al. Scand J Gastroent. 1980; 15: 65-72. 
Bilag/links
06.2.HH.10.12 Bilag 1. Kort vejledning - Måling af pH
Beregning i hånden.
Først beregnes koncentrationerne i standarder – blod – urin, dernæst beregnes galaktoseeliminationshastighed.
Middelværdien af extinctioner for standard 1,0 mmol/l beregnes:
A= ml fuldblod
B= ml perchlorsyre
P= A x (0,95-(0,25xHct. i fraction))
(B+ P)/ A = fældningskorrektion ( omregning fra ml blod til ml blodvand).
Dobbeltbestemmelserne beregnes med 3 decimaler, resultatet afleveres med 2 decimaler
Indgiven mængde: sprøjtevægt x 500 / 1,19 x180,16 mmol galaktose
1,19 er injektionsvæskens massefylde (g/ml)
500 er galaktosekoncentrationen i injektionsvæsken (mg/ml)
180,16 er galaktoses molvægt (g/mol)
Udskilt mængde: urinkonc. X diurese = mmol galaktose
Ved urinmangel / spild skal standardudskillelsen 16,65 mmol/l benyttes.
Galaktoseeliminationshastighed:
GE: (indgiven mængde – udskilt mængde) / tc=0 + 7 mmol/min
Interceptet på x–aksen tc=0 beregnes v.h.a. lineær regression for punkterne x ³ 20 min og
y ³.2,2 mmol/l.
Hvis y < 2,2 mmol/l. vil tallene fremstå med rød skrift,disse slettes før beregning.
tc=0 svarer til den tid, der vil gå fra injektionstidspunktet, til al galaktosen er fjernet fra kroppen,
under forudsætning af at omsætningen i leveren er konstant.
Analysespredning:
Analysespredningen i området 2,0-20 mmol/l er gennemsnitlig 1%
i området 0,4 – 2.0 mmol/l er 4 - 5%.