Formål
Målgrupper og anvendelsesområde
Definitioner
Fremgangsmåde, herunder formularer og dokumentation
Ansvar og organisering
Referencer, lovgivning og faglig evidens samt links hertil
Bilag
Målgrupper og anvendelsesområde
Sygeplejersker, bioanalytikere og læger på Afdeling for Nuklearmedicin, Herlev Hospital.
Fremgangsmåde, herunder formularer og dokumentation
Reagenser
- Methylcellullose 2%
- Methylcellulose 15 2g
- NaCl 900 mg
- Sterilt vand til 100 ml
- Hætteglas à 10 ml, autoklaveret.
- NaCl 0,9 % til infusion
- Ceretec, Tc-99m EXAMETAZIM
- Heparin 5000 IE/ml
Utensilier
- Engangssprøjter 60 ml og10 ml
- Kanyler, kombinationpropper.
- Venflon 18G
- Forlængerslange, steril 30 cm Ø 3,0/4,1 mm
- Polycarbonatglas, sterile, Tecnunc 3-48097
- Sterile handsker
- Spinalkanyle 1,2x100 mm 18G
- Engangsdråbetællere, strålesteriliseret
- Kølecentrifuge, Hettich Rotina 35 R
- Laminar-flow-bænk
- 3 Agarplader
Princip
Leukocytternes membran er i modsætning til erytrocytternes, ikke umiddelbart gennemtrængelig for 99MTc-pertechnetat.
For at få transporteret 99MTc-pertechnetat over membranen og binde det stabilt intracellulært, må man binde det komplekst til et stof med lipofile egenskaber. Dette stof er HMPAO, hexametylpropylene-amineoxim, hvor oxim-delen er lipofil. Komplekset er ustabilt i præparationsvialen, og skal derfor bruges inden ½ time efter fremstilling. Efter inkubation med leukocytterne, er komplekset stabilt i ca. 2 timer.
Blodprøver
Patienten identificeres. Kontrollen består i patientens egen angivelse af navn og personnummer, som sammenholdes med oplysningerne på henvisningen. Er dette ikke muligt grundet patientens tilstand, kontrolleres data på patientarmbåndet. Er der ikke patientarmbånd, identificeres patienten af pårørende eller personalet.
I to 60 ml engangssprøjter mærket med patientens data og med hver 1 ml 5000 IE heparin i, tages 2x55 ml fuldblod fra en venflon, lagt i en stor armvene. Blodet må ikke trækkes hårdt ud, leukocytterne er sarte og bliver let beskadiget.
Sprøjterne lukkes med en kombinationsprop og vendes omhyggeligt.
De to 60 ml sprøjter med blod bringes til mærknigs laboratoriet.
Der startes med at tænde LAF Bænken.
(Hvis dette ikke er gjort af radiokemipersonalet, skal være tændt 15 min før brug)
Før opstart af mærkningen opsættes 3 stk. nedfaldsplader (agarplader står i kemikalieskab i radiokemi), disse skal stå i LAF-bænken under hele mærkningsproceduren.
- Pladerne mærkes med A (placeres i venstre hjørne af LAF-bænken),
- B (placeres i midten)
- C (placeres i højre hjørne af LAF-bænken).
- Alle nedfaldspladerne mærkes derudover med dato, LAF-bænk nr. og initialer. Efter endt mærkning placeres pladerne i tilhørende pose.
- Pladerne stilles til inkubation i skabet i mærkningslaboratoriet, som aflæses efter 2 uge af den bioanalytiker der er sat til at mærke / eller radiokemi personalet.
Sedimentering
Herefter foregår alle arbejdsprocedurer i LAF-bænk med sterile handsker på.
Til hver af sprøjterne tilsættes 4 ml metylcellullose 2%, og sprøjterne vendes igen, tømmes for luft, så der ikke er blod i sprøjtespidsen.
Derefter påsættes ren kanyle og sprøjterne hænges til sedimentering i LAF-bænken, med kanylen opad.
Cellerne sedimenterer i 45 min.
Efter 45 min. sedimentering presser man buffycoat (plasma og leukocytter) gennem en steril forlængerslange, over i sterile polycarbonatglas med skruelåg.
Bemærk at alle glas mærkes tydeligt med patientens data.
Pas på ikke at få erytrocytter med. Glassene fyldes helt, kan evt. fyldes efter med 0,9% NaCl.
Kontakt den person der skal præparere Ceretec kittet
Tidspunktet for præparation aftales, når blodet er sat til at sedimentere.
Centrifugering
Glassene centrifugeres i kølecentrifuge (Hettich Rotina 35R), 150G (1000 omdr./min.), 5 min. og køling til 40, ingen bremse.
Supernatanten hældes fra de enkelte glas og kasseres.
Bundfaldet, pelleten, bankes forsigtigt op. Pelleterne pooles ved hjælp af sterile engangs-dråbetællere og NaCl til ét af glassene, fyldes op med NaCl og centrifugeres igen, 150G (1000 omdr./min.), 5 min. 40, ingen bremse.
Nu hentes Ceretec i gennemstiksskabet.
Supernatanten hældes fra og kasseres, pellet bankes op, 2 ml NaCl tilsættes under blanding, så man får en homogen suspension af celler.
Mærkning
Vial med Ceretec kit tages fra gennemstiksskab, dosis trækkes op, måles og sættes til cellesuspentionen.
Cellerne inkuberer 15 min. Vippes evt. en gang undervejs, hvis der er mange celler.
Efter inkubation fyldes glasset op med NaCl, det vendes godt, og centrifugeres som før ved 150 G (1000omdr./min.), i 5 min, 40, ingen bremse.
Bindingsprocent
Bindingsprocent måles ved først at måle det fulde glas med celler og supernatant, derefter hældes supernatanten ned i et sterilt prøverør, og cellerne måles alene. Forholdet mellem celler plus supernatant og celler er binding-procenten.
Eksempel:
###TABEL_1###
Efter måling af bindingsprocent, bankes cellerne op og resuspenderes i 2,5 ml NaCl.
En 10 ml sprøjte påsættes en spinalkanyle, og de mærkede celler suges op i sprøjten. En kombinatoinsprop påsættes, og sprøjten måles i dosis-kalibrator, samt i IBC, mærkat med patientens data, datoen og dosis sættes på.
Alt affald i LAF-bænken samles i en gul kanyleboks, brug en lille gul kanyle beholder til radioaktivt affald der påsættes låg og gul etiket mærket med dato og 99MTc og en stor til patalogisk affald som ikke skal opbevares til henfald.
Rengøring
Først ved aftørring Wet Wipe Universal og derefter med 70% ethanol og fnugfrit papir.
Når Wet Wipe pakken åbnes, påføres dato. Pakken kan holde sig 1 mdr. efter åbning.
LAF bænken efterlades på ½ ventilation, må aldrig slukkes helt.
Rengøring af LAF- bænk dokumenteres nederst på skema til leukocytmærkning.
Efter hver mærkning rengøres centrifugen.
Centrifugen og centrifugeholderne aftørres med WetWipe Triamin Disinfection (gule klude)
Rengøring af centrifugen dokumenteres nederst på skema til leukocytmærkning.
Injektion
Forud for injektion af cellerne, identificeres patienten. Kontrollen består i patientens egen angivelse af navn og personnummer, som sammenholdes med oplysningerne på injektionssprøjten. Er dette ikke muligt grundet patientens tilstand, kontrolleres data på patientarmbåndet. Er der ikke patientarmbånd, identificeres patienten af pårørende eller personalet.
Cellerne injiceres, i den tidligere anlagte venflon, dosis og tidspunkt noteres på henvisningen..
Bemærkning: Mærkede leukocytter er holdbare indtil 2 timer inden injektion.
Den lille gule boks sættes til henfald i skuffen for den på gældende dag i vareslusen.
Ansvar og organisering
Radiokemigruppen har ansvaret for indhold og udformningen af instruksen.
Den enkelte medarbejder har ansvaret for at kende og følge vejledningen.
Referencer, lovgivning og faglig evidens samt links hertil
LOV nr. 23 af 15/01/2018
BEK 669 af 01/07/2019
BEK 670 af 01/07/2019
BEK 671 af 01/07/2019
