IVF inseminering / Fertilisering

kl. 12.00 (ca. ½ time før fertilisering)

Sædprøven sættes i inkubator med løsnet låg til opvarmning, så sædprøvens temperatur og pH er den samme, som i mediet omkring æggene.

*) Ved PGT-A kan man evt. fertilisere kl. 12. Sædvanligvis fertiliseres kl. 12.30 - 13.00, men hyppigst kl. 13, så vi kan nå at se PN, inden de fader.
Ca. 2-3 timer efter aspirationen tilsættes 50 µl sperm-suspension til 4-kammerskålene mærket ”Asp” i brønde med oocytter (til IVF). Vær omhyggelig med at tilsætningen sker i bunden af brøndene. Efter tilsætning af sæd aftørres Eppendorf pipetten med sterilt vand.
Tjek om man kan se sædceller i brønden ved at ændre på lyset i mikroskopet.
Vigtigt: Husk, udover Witness, dobbeltvidne til at konfirmere, at navn og cpr.nr. på sædglas og 4-kammerskåle stemmer overens.
Bioanalytikeren (og dobbeltvidnet) kvitterer på ASP-skemaet med initialer og klokkeslæt og ’fertiliserer’ i Formatex. Med dobbeltvidnets samtykke kan fertiliserende bioanalytiker sætte vidnets initialer.

COC observeres efter 2 timers inkubering med sædcellerne og følgende ses, når nok sædceller har nået zonaen: Hvis ’skyen har lagt sig’ og oocytten med en mørk rand af cumulusceller ligger frit i midten af skyen, flyttes disse med over i frisk medie i brønd 3 eller 4 (der tages medie fra brønd 3 eller 4 og pustes ud over oocytten/erne og så lidt medie som muligt føres med). Der kan evt. lige kigges i Nikon 400 på de første oocytter før flytning og visualisere at oocytten ligger med kransen af cumulusceller, som er helt ’levende’ af sædceller.
Hvis der slet ikke er tegn på at sædcellerne har nået zonaen, lad oocytterne og sædcellerne inkubere til næste morgen.
Marker på låget antal, der ligger i brøndene.

Den første 4-kammerskål mærket ”Asp I”, indeholdende sædvanligvis op til 8 oocytter samt den første embryoslide eller dyrkningsskål tages ud af inkubatoren.
Slidet eller skålen placeres under CO₂- klokken (kan evt. forblive i inkubator indtil rensningen af oocytter er færdig) og "Asp I" - skålen placeres ved stereomikroskopet i flowbænken
Under stereomikroskop renses oocytterne ved hjælp af en denuderingspipette. Hvis cumulusskyen er meget tæt, kan der anvendes kanyler til at 'åbne' denne, så oocytten kommer fri.
Slidet/skålen tages frem og de rensede oocytter flyttes over i dyrkningsdråberne/brøndene (ét æg pr. dråbe). Dette gøres med en denuderingspipette, således at så lidt fertiliseringsmedie kommer med over i de "friske" cleavagedråber. Inden en oocyt anbringes i sin dyrkningsdråbe/brønd renses den i skylledråberne.
Næste "Asp" og "dyrk" -skål tages ud af inkubatoren og samme procedure som ovenfor beskrevet foretages.
Embryoslidet sættes i embryoskop ved at trykke på ”Add Slide” på skærmen. Tryk på knappen på lågen, når den lyser hvid, indsæt slide og luk lågen. På skærmen fremkommer pt’s navn + CPR-nr. – tryk ”OK” hvis det stemmer overens med det isatte slide. På næste skærmbillede tastes injiceringsstidspunkt samt antal æg i slidet, tryk ”OK”.
Efter tjek (at der ikke er æg i!) smides de tomme 4-kammer-skåle ud For registrering etc. se 'Embryovurdering'

Dag 3

På dag 3 skiftes dyrkningsmedie ved at suge 90 µl cleavagemedie op fra hver ”arm” i Embryoslidet med en Eppendorf pipette og derefter tilsætte 180 µl opvarmet og opgasset blastocystmedie (indsat i inkubator 1 dagen før) til hver ”arm”. Dato samt initialer for bioanalytiker noteres på Asp-skema.

IVF-proceduren (Inseminering og skift) Fertilitetslab

Bilag