Formål
Målgruppe og anvendelsområde
Fremgangsmåde
Ansvar og organisering
Formularer
Definitioner
Referencer
Bilag/links
Formål
Efter intravenøs injektion af de mærkede leukocytter (granulocytter) kan man, ved hjælp af et gammakamera, evt.visualisere inflammations- eller infektionsfoci, da granulocytterne søger til disse steder. Patienten skal skintigraferes samme dag, som injektionen er givet. Ved meget tidlige billeder ses leukocytakkumulation i lungerne, senere i lever og milt.
Målgruppe og anvendelsesområde
Denne instruks er gældende for alle medarbejdere, der udfører leucocytmærkning med 99mTc-HMPAO i klinisk fysiologisk/nuklearmedicinsk sektion, Funktions- og Billeddiagnostisk Enhed, Hvidovre Hospital.
Princip
Det leukocytrige plasma isoleres efter sedimentation af erythrocytterne med metylcellulose. Leukocytterne isoleres og tilsættes 99mTc- HMPAO (hexametylpropylen-aminoxim), der er i stand til at passere cellemembranen p.g.a. dets lipofile egenskaber. I cellen omdannes HMPAO og en del af det bindes intracellulært, mens en rest senere udskilles via tarmen.
Apparatur
Flowbænk med laboratoriestativer
Sterile handsker
Sterile 10-ml-plastrør
Trevejshane med 10 cm forlænger
Sterile kanyler, sprøjter og eengangspipetter (brug plast til al manipulation med blodet)
Centrifuge
Dosiskalibrator
Gammakamera
Reagenser
NaCl 9 g/l
Heparin 1000 IE/ml
Heparin ukonserveret 1000 IE/ml
Metylcellulose 10 ml-hætteglas (100g indeholder metylcellulose 15 Ph.Eur. 2g, NaCl 0,9g, sterilt vand 97,1g )
Medi-Exametrazim Kit (HMPAO = hexamethylpropylen-aminoxim )
Bact/Alert hætteglas til børn, leveres af 445 ( se 09.2 HH 5 bilag 2 )
Fremgangsmåde
Alle procedurer udføres aseptisk i flowbænk, brug sterile handsker. Al centrifugering skal foregå uden bremse. Vi skelner ikke mellem forskellige typer af leukocytter, men i praksis er det granulocytterne , der mærkes. Det er væsentligt at undgå kontakt med metal, voldsom rysten eller blanding, da granulocyterne ellers kan aktiveres. Dette vil medføre et dårligere præparat. Alle sprøjter, glas og stativ skal være mærket med patientdata. De 10-ml plastrør, som plasma tappes i, mærkes med et "hvidt nr", der også sættes på fremstillingsskemaet ( det er svært at se cellerne, hvis man bruger store navneetiketter).
Udfyld 06.2.HH.10.10.1 formular a. under mærkningen. Formularer gemmes i 5 år i ringbind.
- I to sprøjter med 1 ml ukonserveret heparin 1000 IE/ml. i hver, tages 2 x 60 ml blod fra patienten. Sprøjterne mærkes med patientdata. Hos børn nedsættes blodmængden, ved meget små børn, kan det være en fordel at tage blodet i 20-ml-sprøjter.
- Fra sprøjterne overføres ca. 10 ml blod til et 10-ml-plastrør. Centrifugeres i 10 min ved 2600 omdr/min ( 150g ). Plasmaet trækkes op i en 10-ml-sprøjte der gemmes i flowbænken. Resten kasseres.
- 60-ml-sprøjterne tilsættes hver 3 ml metylcellulose. Vendes omhyggeligt, luften fjernes og de påsættes trevejshaner med forlænger. Derefter fastgøres de i et laboratoriestativ i en vinkel på 70-80 grader. Erythrocyterne vil derefter sedimentere ned i bunden af sprøjterne. ( Man kan evt. banke let på sprøjterne efter 10 min. ) Sprøjterne hænger nu i ro i 45-50 min.
- Det leukocytrige plasma afpippeteres i 10-ml-plastrør, sædvanligvis 5-6 stk.
- Plastrørerne centrifugeres i 5 min uden bremse ved 1000 omdr/min ( 150g ).
- Supernatanterne hældes med et snuptag fra de enkelte rør og precipitaterne bankes forsigtigt op. Alle precipitaterne pooles i eet rør, idet der tilsættes 1-2 ml NaCl til første glas og med en eengangspipette føres dette videre til 2-3-4-5 o.s.v. Rørene skylles en ekstra gang med 1-2 ml.
- Prøverøret centrifugeres i 5 min uden bremse ved 1000 omdr/min.
- Under centrifugeringen fremstilles et Medi-Exametrazim-kit. (Isotopbianalytikeren kontaktes på 2-2039, som fremstiller kittet i radiofarmacien)
- Prøverørets supernatant afhældes ( tag evt. 4 ml. fra til mikrobiologisk test ), precipitatet bankes forsigtigt op og blandes med 2 ml NaCl.
- Leukocytsuspensionen tilsættes under forsigtig rysten ca. 1000 MBq 99mTc-Medi-Exametrazim. Plastrøret vendes nu og da i løbet af de næste 15 min.
- Derefter tilsættes ca. 3 ml NaCl, vendes og centrifugeres i 5 min ved 1000 omdr/min.
- Mål rørets aktivitet i dosiskailbratoren og noter aktiviteten, hæld supernatanten fra og mål igen på precipitatet og noter aktiviteten. Udregn mærkningsprocent. Ved mærkningsprocent mindre end 50 % konfereres med ledende bioanalytiker / vagthavende læge inden injektion.
- Precipitatet “bankes forsigtigt op” og blandes først med 2,5 ml NaCL derefter med 3 ml plasma (punkt 2). Se efter, at der ikke er klumper i suspensionen. Forsøg evt. at blande med en plastpipette.
- Suspensionen trækkes op i en 10-ml-sprøjte påsat 3-vejs hane med forlænger ( tag evt. ca. 0,5 ml fra til differentialtælling ) og aktiviteten måles og noteres. Maksimumdosis til patienten 800 MBq. Sprøjten mærkes med patientdata og aktivitet.
- Check patientens identitet endnu engang umiddelbart inden injektionen gives intravenøst. Tidspunkt og aktivitet noteres på patientlabel, som afleveres i kamerarum.
- Aftal med forvagt og personale hvornår der skal optages og informer patienten
Kvalitetskontrol
- Der udfyldes et mærkningskema pr patient. Her udregnes bl.a. mærkningsprocenten.
- Ved den første mærkning i hver måned udføres mikrobiologisk test på supernatanten fra punkt 9. 4 ml supernatant tilsættes aseptisk til et Bact/Alert-hætteglas, der sammen med en prøveseddel anbringes i varmeskabet på 445. Se bilag 09.2 HH 5 bilag 2.
- Ved den første mærkning i hver måned udføres desuden differentialtælling på Klinisk biokemisk Afdeling. Tag 0,5 ml fra det færdige præparat i et KK2-glas og udfyld blanket: ”Kontrol af leucocytmærkning”. Indlæses ikke, men håndafleveres på 339 med besked om at præparatet skal håndtælles.
OBS ! Når nye bioanalytikere oplæres, skal der altid være foretaget fuld kvalitetskontrol og foreligge svar på deres “øvepræparat”, inden de må foretage mærkning af patientblod.
Leukocytmærkning kræver speciel tilladelse fra Lægemiddelstyrelsen. Afdelingens tilladelse giver lov til at udføre to mærkninger fra to forskellige patienter samtidigt. Det forudsættes, at der arbejdes forskudt med prøvematerialet, således at patient 1`s leukocytter centrifugeres mens patient 2`leukocytter vaskes og omvendt. På denne måde undgår man at have åbent prøvemateriale i flowbænken fra to forskellige patienter på samme tid.
Fejlkilder
Hvis præparatet kommer i forbindelse med metal og ved voldsom manipulation af præparatet kan det medføre aktivering af granulocyterne.
Ringe antal leukocytter kan medføre lav mærkningsprocent.
Fejlagtig brug af konserveret heparin kan medføre ringe mærkning p.g.a. ændret iltningstrin for pertechnetationen.
Ansvar og organisering
Superbrugeren har ansvar for at udarbejde og revidere instruksen.
Sektionsledelsen har ansvar for at godkende og realisere instruksen.
Alle medarbejdere i målgruppen har ansvar for at følge denne instruks.
Formularer
06.2.HH.10.10.1. Formular a. Leucocytmærkning med 99mTc-HMPAO
06.2.HH.10.10.1. Formular b. Mikrobiologisk kontrol af cellemærkning
Definitioner
Ikke relevant
Referencer
Indlægsseddel fra Medi-Exametrazim.
Bilag/links
09.2.HH.5. Bilag 2. Mikrobiologisk kontrol