JACIE børn: CD45RA depleterede T-lymfocytter ved virusinfektion (Kap.18)

Især efter allogen haplo HCT er der pga. fraværet/reduktionen af T-celler (alfa/beta positive T-celler) en betydeligt øget risiko for virale infektioner (1). Med henblik på at øge immuniteten mod virus (f.eks. CMV, EBV, ADV, HHV6,7 ETC.) kan det derfor være ønskeligt at indgive ekstra cytotoksiske T-celler.

Tilbage til top

Fagpersonale primært læger, der arbejder med patienter, der er knoglemarvtransplanteret. 

Tilbage til top

Tilbage til top

4.1 Muligheder for at øge immuniteten mod virus 

Der eksisterer forskellige muligheder i denne henseende, f.eks.

► 1) oprensning af virus-stimulerede T-celler fra donor (in vitro stimuleret med virus specifikke antigener, hvorefter de aktiverede IFNγ-secernerende T-celler oprenses magnetisk med et anti-CD45/IFNγ antistof), 

► 2) virus-specifikke opformerede T-celler fra bank af nedfrosne celler fra ”third party” HLA klasse I udvalgte donorer,

► 3) uforarbejdede T-celler fra donor som er seropositiv for det relevante virus (DLI).

Mulighed 1) og 2) er dyre og kræver p.t. udenlandsk hjælp og er i øvrigt af noget usikker effekt. Mulighed 3) er problematisk pga. den meget store risiko for GvHD ved indgift af et intakt T-celleprodukt efter haplo HCT.

På denne baggrund har det været foreslået (2) at den virus sero-positive haplo-donor kunne være donor til et forarbejdet T-celle produkt, hvorfra de T-celler som især menes at give GvHD først er fjernet, men hvor de hukommelses T-celler, der giver immunitet mod virus, er bevaret.

Selve alfa/beta depleteringen, som gennemføres initialt på donor haplo T-celler giver i nogen grad en tilbageholdelse af virus specifikke primitive gamma/delta celler, men især fjernes de celler som giver anledning til GvHD.

Det har længe været kendt at CD45 positive T-celler (både CD4 og CD8 pos T-celler) kunne deles i to, om end overlappende, fraktioner ved hjælp af markering med monoklonale antistoffer. Som hovedregel er naïve celler CD45RA positive mens memory cellerne som hovedregel er CD45RO positive(3, 4, 7). CD45RO memory celler har tidligere været stimuleret af deres relevante antigen, typisk virus. Derimod må CD45RA positive celler, der som anført er naïve, antages at have et langt bredere repertoire over for i princippet alle tænkelige antigener, dvs. også celler, der evt. kan forårsage GvHD.

Celler der bærer CD45RA på overfladen kan fjernes ved hjælp af en magnetisk CliniMACS søjle (2, 5, 6) efter mærkning med monoklonale antistoffer. Dette kan foretages med relativt kort frist (dage - uger) i Stamcellesektionen i Blodbanken efter nærmere aftale.

Herved fås et produkt der indeholder forskellige typer af lymfocytter inklusive (delmængde af) B-celler, NK-celler og mest vigtigt CD45RO positive T-celler med formodet hukommelse over for de virus donor har haft og bekæmpet.

4.2 Metode

Desværre er der relativt beskeden erfaring med donor leukocyt infusion (DLI) af CD45RA depleterede T-celler, men fra egne erfaringer med CD45RA neg DLI (per sep 2018: 2 x CD45RA depleteret DLI 25.000 CD3 pos celler/kg) vides, at der er en ikke ubetydelig risiko for at udløse GvHD. Fra publikationer, hvor man har foretaget selve transplantationen med CD45RA depleterede GCSF-inducerede perifere blod stamceller ved man at CD45RA depleterede CD3 positive T-celler/kg ikke giver voldsom GvHD (0% og 17,6% >gr III) (1,2 ). På denne baggrund må man fortsat konstatere at forekomsten af GvHD ikke er sikkert kendt efter denne procedure.

På denne baggrund foreslås følgende strategi ved behandling med CD45RA depleterede celler af virusinfektion hos haplotransplanteret patient:

1. Det undersøges om donor er sero positiv for det (de) relevante virus, som ikke kan behandles sufficient med antivirale midler. Hvis ja
2. Kontaktes Stamcellesektionen, Blodbanken, med henblik på aftale vedr. høst af donor og specielt oprensning af produkt, der er en højt specialiseret og ressourcekrævende procedure.
3. Dosis aftales som antal CD45RA depleterede CD3+ celler per kg, hvoraf ca. 95% vil være CD45RO positive. Første dosis er 10.000-25.000 CD3+ celler per kg. Ved depletionen fjernes ca. 80-90% af de CD3+ celler, så ud fra en antaget koncentration af CD3+ celler på ca. 0.7 mio/mL, skal der tappes ca. 10-15 mL blod for hver 10⁶ CD45RA depleterede CD3 positive T-celler, som ønskes. Dette betyder, at den mængde perifert blod, der skal høstes i forbindelse med første DLI er ganske beskeden. Der vil dog ofte oprenses fra en større mængde blod/leukafereseprodukt, hvorefter resten nedfryses i aftalte doser.
4. DLI gives i.v. til patienten. Ingen særlige forholdsregler.
5. Optræder GvHD inden for de første tre uger af infusionen gives ikke yderligere DLI.
6. Optræder GvHD ikke kan der efter tre uger gives yderligere DLI nu 10 gange den initiale dosis. Hvis virus DNA-titeren er tydeligt faldende afventes dog.
7. Optræder GvHD fortsat ikke efter yderligere tre uger kan gives yderligere 5 – 10 gange flere CD45RA depleterede CD3 positive T-celler.

Tilbage til top

JACIE (v/8): B3.3.4.23

Tilbage til top

1) Greco R, Crucitti L, Noviello M, Racca S, Mannina D, Forcina A, Lorentino F,Valtolina V, Rolla S, Dvir R, Morelli M, Giglio F, Barbanti MC, Lupo StanghelliniMT, Oltolini C, Vago L, Scarpellini P, Assanelli A, Carrabba MG, Marktel S,Bernardi M, Corti C, Clementi M, Peccatori J, Bonini C, Ciceri F. HumanHerpesvirus 6 Infection Following Haploidentical Transplantation: Immune Recovery and Outcome. Biol Blood Marrow Transplant. 2016 Dec;22(12):2250-2255.

2) Bleakley M, Heimfeld S, Jones LA, Turtle C, Krause D, Riddell SR, et al. Engineering human peripheral blood stem cell grafts that are depleted of naive T cells and retain functional pathogen-specific memory T cells. Biol Blood Marrow Transplant. 2014; 20(5):705–16.

3) Sallusto F, Lenig D, Förster R, Lipp M, Lanzavecchia A (October 1999). "Two subsets of memory T lymphocytes with distinct homing potentials and effector functions". Nature. 401 (6754): 708–12.

4) Akbar AN, Terry L, Timms A, Beverley PC, Janossy G (April 1988). "Loss of CD45R and gain of UCHL1 reactivity is a feature of primed T cells". Journal of Immunology. 140 (7): 2171–8.

5) Müller N, Landwehr K, Langeveld K, Stenzel J, Pouwels W, van der Hoorn MAWG, Seifried E, Bonig H. Generation of alloreactivity-reduced donor lymphocyte products retaining memory function by fully automatic depletion of CD45RA-positive cells. Cytotherapy. 2018 Apr;20(4):532-542.

6) Teschner D, Distler E, Wehler D, Frey M, Marandiuc D, Langeveld K, et al. Depletion of naive T cells using clinical grade magnetic CD45RA beads: a new approach for GVHD prophylaxis. Bone Marrow Transplant. 2014; 49(1):138–44.

7) Mahnke YD, Brodie TM, Sallusto F, Roederer M, Lugli E. The who’s who of T-celldifferentiation: human memory T-cell subsets. European journal of immunology. 2013; 43(11):2797–809.

Tilbage til top