TESA og TESA ICSI , Fertilitetslab

1) At findele nål-aspirat fra testiklen for efterfølgende

2) at isolere sædceller til ICSI

Tilbage til top

Instruksen beskriver de tekniske procedurer ved TESA + TESA ICSI og henvender sig til det sundhedsfaglige personale, der deltager i proceduren.

Tilbage til top

Apparatur

Flowbænk
Inverteret Mikroskop
Mikroskop (10x, 20x og 40x objektiver)

Utensilier

Skåle: 1 ASP skål, 2 dyrkningsskåle til skyl, 1 ICSI-skål til findeling.
14 ml medierør
Sædglas

5 ml medierør eller tube (til SpermMobil opløsning)

Pipette og pipette spidser

2 stk. Pochemålere (tandlægesonder)

Sperm extraction kit (morter) 

Medier

Ferti Medie (Origio)

GM 501 SpermMobil fra Gynemed

For specifikationer: Se aktuelle utensilieliste og lokal klargøringsforskrift.
 

Tilbage til top

Se også "Witness" vejledning i lokale SOP'er på p.drev.

• 1 asp-skål, 2 stk. dyrkningsskåle samt 1 ICSI-skål mærkes med virs og uxors navn, tag og CPR-nummer.
• 2 stk. sædglas mærkes med virs og uxors navn, tag og CPR-nummer.
• 2 stk 14 ml medierør med hver 10 ml Ferti Medie sættes til opgasning med løsnet låg natten over. 

TESA-instrumenterne (pochemålere) kommer fra Sterildepotet i yderpose og æske. Afleveres i depotrum ved omklædningsrummet i kasse mærket ”blandet steril varer”

• VIGTIGT! Når instrumenterne tages i brug, dvs. den sterile pose brydes, gemmes æsken og posen.
• Når instrumenterne har været brugt, skylles de med destilleret vand og lægges tilbage i æsken i posen.
• Det noteres i kalenderen hvor mange TESA-sæt, der er sendt til sterilisering og gerne nummeret på posen/æsken.
• Æsken lægges i grå kasse under opvask i skyllerummet.
• Husk at tjekke om sættet er kommet tilbage efter max. 1 uge.

Tilbage til top

Se også "Witness" vejledning i lokale SOP'er på p.drev.

Identifikation af VIR og evt. UXOR foretages på stue 1 af bioanalytiker og læge.

• Lige inden TESA påbegyndes, tages det opgassede Ferti Medie ud af inkubatoren.  
• Det ene rør med Ferti Medie (herefter kaldet medie) afleveres gennem lugen til sygeplejersken sammen med en stor ASP-skål mærket med cpr-nummer.
• Vævet udhentes med en kanyle og anbringes i dyrkningsskålen, som rækkes igennem lugen til lab.
• Bioanalytikeren vurderer under mikroskopet i flowbænken, om der er tilstrækkeligt væv. Ønskes mere væv meddeles dette til lægen/sygeplejersken.
• Vævet vaskes grundigt ad flere omgange i mediet (ved at flytte vævet over til ny skål med frisk medie) enten med en pipette eller tandlægesonde (hvis dette ikke gøres, vil der være for mange erytrocytter).
• Når vævet er rent: 1) Placeres det sammen med en smule medie (max. 0,6 ml) i en ICSI-skål, hvor det tømmes for sædceller og findeles ved hjælp af tandlægesonderne (nu må vævet ikke flyttes mere).  Man holder vævet med den ene sonde og skraber med den anden, så sædcellerne presses ud af tubuli. ELLER 2) Overføres til morter med ca. 0.3 ml medie og vævet knuses ved at dreje staven mod bunden/siderne. 
• Når vævet er findelt og tubuli tømt ses efter sædceller i mikroskopet ved 200x eller 400x forstørrelse. Information om antal sædceller og deres motilitet samt eventuelle kommentarer vedrørende sædprøven og bioanalytikerens initialer angives på TESA-skemaet. 
• Væv og væske overføres til et sædglas. ICSI-skålen/morteren skylles med medie, som også kommes ned i sædglasset. Der bør dog helst ikke være mere end 2 ml medie i sædglasset (hvis man efterfølgende vil oprense det på gradient). Sædglasset placeres med påskruet låg ved stuetemperatur indtil det skal anvendes eller fryses.
• Ved ICSI: Der laves injektionsskåle som til ICSI (dvs. PVP centralt og opgasset cleavage dråber til oocytterne), men med 4-6 ekstra 8-10 µl Cleavage dråber i venstre side af skålen. Skålen kan også laves, som man har erfaring med fungerer for den enkelte bioanalytiker. Dråber med ufortyndet TESA kan også anvendes. Disse dråber kan evt. laves lidt lange eller trækkes ud i kanten som stjerner. Erytrocytter og andet forstyrrende vil som regel ikke diffundere ud til kanten, men hvis der er motile sædceller vil de svømme ud i disse, hvor der er ’lavvande’. Se næste punkt
• Når ICSI-skålene er varme tilsættes 2 µl (evt. mere) af TESA-prøven til ekstradråberne i venstre side. Altenativt kan ICSI-skålen laves med ufortyndet TESA-prøve, inden der lægges olie over.

Tilbage til top

(kan også anvendes ved meget dårlig sædprøve med immotile sædceller, hvor materialet lægges i dråber før ICSI):

Lav opløsningen i 5 ml medierør, der mærkes ”SpermMobil 25%”

75 µL Ferti Medie

25 µL SpermMobil

eller 

150 µL Ferti Medie

50 µL SpermMobil

eller

300 µL Ferti Medie

100 µL SpermMobil

Der tilsættes 2 µl af opløsningen til 8 µl dråben med tesavæv. Tilsættes modsat injektionssiden af dråben.

• Sædcellerne hentes fra dråben og overføres til PVP-dråben i midten af skålen, hvor de immobiliseres (se under ICSI-procedure) og anbringes ud for et mærke, man har lavet med pipetten i kanten af PVP-dråben. OBS: immobiliserede sædceller (knækket hale) skal anvendes indenfor 2 timer. Gamete Buffer er pH stabil, så ICSI-skålen kan genbruges til flere oocytter.

Nå sædcellerne er fundet og ligger klar, overføres de første denuderede oocytter til ICSI-skålen og ICSI- proceduren udføres som en almindelig. Inden injektion slås sædcellen fem gange over halen.

Tilbage til top

• Ca⁺⁺ - skål vil være klargjort dagen før (se forskrift for Klargøring). De injicerede oocytter placeres i dråberne med Ca⁺⁺ i 15 min. (man kan med fordel vente til alle oocytter er injiceret), derefter skylles de i cleavagedråberne, inden de overføres til Embryoslide/dyrkningsskål.

Tilbage til top

Tesaprøvens kvalitet beskrives efter oprensning. Information om, hvorvidt der er set sædceller og om der er motilitet eller ej, samt initialer af bioanalytikeren, som har været med til at lave TESA'en noteres på TESA aspirationsskemaet. Desuden noteres tidspunktet for TESA- indgrebet. Initialerne for den/de bioanalytikere som henholdsvis har oprenset sædprøven og har lavet ICSI'en noteres både på TESA-aspirationsskema og i Formatex. Desuden angives dag og tidspunkt for sædoprensning og ICSI i Formatex OG der noteres om der er injiceret med motile eller immotile sædceller, eller både-og. Der hakkes af på skemaet som kvittering for indtastning. 

Klinikledelsen er ansvarlig det faglige indhold af instruksen, samt at instruksen er implementeret.

Den bioanalytiker, der håndterer vævet, er ansvarlig for dette.

Sundhedspersonale, der deltager i proceduren, er ansvarlig for korrekt identifikation og dokumentation af proceduren.