AHA og kollaps, Fertilitetslab

Bioanalytikere i fertilitetslaboratoriet

AHA: Assisted hatching

AHA

Formål

At forbedre chancen for implantation ved at fremme hatching.

Udføres rutinemæssigt på:

• Optøede embryoner.
• Når der er lagt topscore embryoner tilbage 2 gange uden opnåelse af graviditet.

Metode

Delvis eller helt gennembrud af Zona Pellucida med laser.

Ansvarlig

Den bioanalytiker, der udfører AHA.

Apparatur

• Mikroskop med monteret laser

Procedure

1. Tjek om laseren opfører sig som forventet. Udfør evt. laser alignment. Vælg ”Laser Settings”, derefter ”Laser Alignment” på skærmen og følg instruktionen på skærmen (ved ”The pilot is now switched on” husk at skrue ned for lys på mikroskop, stil skarpt på rød ”plet”, følg derefter videre instruks på skærmen).
2. AHA kan udføres når embryonet er lagt i transfereringsskålen – kan også foretages i embryoslide/dyrkningsskål.
3. Skålen med embryonet placeres under mikroskopet. Stil skarpt på zona med laserobjektivet.
4. Indstil på "biopsi mode". Vælg ca. 0.2 - 0,4 ms (husk; jo højere ms jo højere risiko for skade, da varmen fra "skuddet" spreder sig). Er embryonet ikke kollapset, vælges 0,2 ms og man kan evt. vælge at tynde zona'en i stedet for at skyde igennem, hvis man er bange for at komme for tæt på trofektodermcellerne. Hvis cellerne er kollapset, så de ligger langt fra zona, kan man vælge større ms, op til 0,4 ms og under 10 µm, og "skyde" langt fra trofektodermcellerne.
5. Cleavage stage: Marker 25-30 µm imellem to blastomerer og skyd, så skudlinjen følger zona, se vedhæftede fil. Hvis zona ikke er gennembrudt, skyd 2 skud der bryder igennem (hullet bliver konisk – bredest mod overfladen). Når man skal udføre AHA på embryoner mhp. biopsi dagen efter, skydes kun en lille kanal gennem zona, eller zona tyndes.

Blastocyst: Hvis stadie B3: Marker 25-30 µm og skyd så skudlinjen følger zona. Hvis zona ikke er gennembrudt, skyd igen 1-2 skud der bryder igennem.

Hvis stadie B4: Skyd et enkelt hul i zona eller tynd zona lidt uden at skyde igennem. Undgå at ramme trofektodermcellerne. Hvis blastocysten kollapser, kan evt. skydes en ”stribe” i zona. Hvis stadie B5: Ved hatching udføres ikke AHA.

 Ved tø: Umiddelbart efter optøning af kollapsede blastocyster skydes en linje tværs gennem zona modsat indercellemassens placering; se punkt 4.. Alternativt kan man vælge at kurve skudlinien, så den følger zona. Generelt stiles efter en åbning på ca. 25% af zona. Hvis cellerne er kollapset så meget, at man har langt mellem zona og celler, kan man vælge lidt større

Se vedhæftede fil under "Bilag"

Formål                        

At kollapse blastocyster før vitrifikation, så diffusions-radius for kryoprotektant minimeres

Ansvar

Den bioanalytiker, der vitrificerer.

Apparatur                        

Saturn laser

Procedure

Alle blastocyster kollapses inden vitrification, hvis de ikke allerede er kollapset af sig selv. Det kan udføres i embryoslide eller dyrkningsskål.

Brug ca. 0,2 ms single (maks. 4,3 µm) og skyd i samlingen mellem to trophektodermceller så langt væk fra indercellemassen som muligt. Hvis kollaps ikke initieres, kan der skydes igen. 

Se vedhæftede fil under "Bilag".

Ledelsen er ansvarlig for det faglige indhold af instruksen samt at den er implementeret

Den enkelte sundhedsfaglige, der udfører AHA og kollaps, er ansvarlig for at kende og anvende instruksen

  Find det på P-drevet (link virker ikke). P:\Gynækologisk-Obstetrisk Afdeling G\11 FERTILITET\Laboratoriet\SOP'er lokale\AHA og Kollaps_billeder